विवरण:

पेप्टाइड मैपिंग का उपयोग करके प्रोटीन या एंटीबॉडी की प्राथमिक संरचना में सूक्ष्म परिवर्तनों की पहचान की जा सकती है जो प्रोटीन की गतिविधि या बंधन आत्मीयता को प्रभावित कर सकते हैं।एलसी-एमएस/एमएस द्वारा पेप्टाइड मैपिंग प्रोटीन या एंटीबॉडी के प्राथमिक अनुक्रम की पुष्टि करने के लिए सबसे शक्तिशाली गुणात्मक परीक्षणों में से एक हैइस सेवा का उपयोग एक ही प्रोटीन, एंटीबॉडी या बायोसिमिलर के विभिन्न लोटों की तुलना करने के लिए किया जा सकता है।

एलसी-एमएस/एमएस द्वारा पेप्टाइड मैपिंग विश्लेषण की सेवा इसमें शामिल हैंः

• रुचि के एंटीबॉडी/प्रोटीन को प्रोटियोलिटिक एंजाइम जैसे कि LysC या ट्राइप्सिन के साथ विघटित, कम और पचाना होता है।
• वैकल्पिक: प्रोटीन के अनुक्रम कवरेज को बढ़ाने के लिए एक दूसरे प्रोटियोलिटिक एंजाइम का प्रयोग किया जाता है।
• परिणामी पेप्टाइड मिश्रणों को रिवर्स-फेज एचपीएलसी पर अलग किया जाता है। यूवी 214 एनएम पर यूवी अवशोषण का क्रोमैटोग्राफ उत्पन्न किया जाता है।
• एचपीएलसी पृथक्करण के बाद, उच्च संकल्प द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर (थर्मो फिशर ऑर्बिट्राप वेलोस या फ्यूजन) द्वारा आगे का विश्लेषण किया जाता है।
• प्रोटीन का एक पेप्टाइड मानचित्र एक संदर्भ प्रोटीन के साथ तुलना के लिए उत्पन्न किया जाता है।
• शिखरों का विश्लेषण प्राथमिक अनुक्रम में किया जाता है।
• वैकल्पिक (दो या अधिक नमूने): प्रोटीन के बीच लोट-टू-लॉट भिन्नता का आकलन करने या बायोसिमिलर की तुलना करने के लिए तुलनात्मकता मूल्यांकन किया जाता है।

दी जाने वाली जानकारीः

• प्राथमिक अनुक्रमों की पुष्टि (अनुक्रम कवरेजः एक एंजाइम का उपयोग करके 60-90%, दो या अधिक एंजाइमों का उपयोग करके> 98%) ।
• एन-लिंक्ड ओलिगोसाकारिडों का ग्लाइकोप्रोफाइलिंग (ग्लाइकोफॉर्म की विषमता और साइट कब्जे का अनुमान) ।
• पीटीएम की पहचान और अनुमानित मात्रात्मकता जैसे कि डीमाइडिशन, ऑक्सीकरण,एन-टर्म पायरोग्लूटामेट गठन और सी-टर्म लीज प्रसंस्करण (परिवर्तित अमीनो एसिड स्थिति और % परिवर्तन का पता लगाया जा सकता है).
• विभिन्न लोटों के बीच समानता का आकलन।
• बायोसिमिलर के लिए तुलनात्मकता मूल्यांकन।

नमूना उपचारः विवर्तन, कमी/अल्किलेशन और एंजाइमिक पाचन के बाद एलसी-एमएस या एलसी-एमएस/एमएस।