पुनःसंयोजक प्रोटीन एक प्रोटीन है जिसे संशोधित जीन - पुनःसंयोजक जीन द्वारा कोडित किया जाता है और विशिष्ट पुनःसंयोजक अभिव्यक्ति प्रणाली द्वारा उत्पन्न किया जाता है (प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली देखें) ।पुनःसंयोजक जीन एक नया आनुवंशिक संयोजन है जिसमें एक या एक से अधिक डीएनए खंड या जीन एक अलग अणु या अन्य प्रजातियों से डाले गए हैंप्राकृतिक प्रोटीन की तुलना में, पुनर्मिलन प्रोटीन का उत्पादन अपेक्षाकृत आसानी से बड़ी मात्रा में किया जा सकता है।
पुनर्मिलन प्रोटीन जैविक प्रक्रियाओं जैसे कि साइटोकिन और विकास कारकों, एंजाइम और किनेज़ अनुसंधान और पूरक प्रणाली कार्यों के अध्ययन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।पुनःसंयोजक प्रोटीन को अत्यधिक शक्तिशाली दवाओं के रूप में जाना जाता है जो लक्ष्य से बाहर के दुष्प्रभावों से सुरक्षित हैं, छोटे अणुओं की तुलना में विकसित होने में कम समय लगता है (पुनर्संयोजक प्रोटीन दवाएं देखें) ।
पुनःसंयोजक प्रोटीन बनाने के लिए, जीन को अलग किया जाता है और एक अभिव्यक्ति वेक्टर में क्लोन किया जाता है। पुनःसंयोजक प्रोटीन उत्पन्न करने के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली की आवश्यकता होती है,प्रोटीन शुद्धिकरण प्रणाली और प्रोटीन पहचान प्रणाली.
पुनःसंयोजक प्रोटीन प्राप्त करने के लिए बुनियादी कदमः
1रुचि के जीन का प्रवर्धन
2. क्लोनिंग वेक्टर में डालें.
3उप क्लोनिंग अभिव्यक्ति वेक्टर में।
4प्रोटीन व्यक्त करने वाले मेजबान (बैक्टीरिया (ई कोलाई), खमीर, स्तनधारी कोशिका या बैकुलोवायरस-कीट कोशिका प्रणाली) में परिवर्तन।
5पुनःसंयोजक प्रोटीन की पहचान के लिए परीक्षण।
6बड़े पैमाने पर उत्पादन (बड़े पैमाने पर किण्वक)
7पृथक्करण और शुद्धिकरण।
चूंकि प्रोटीन के रासायनिक और भौतिक गुण भिन्न होते हैं, इसलिए उन्हें कई आम तौर पर उपयोग की जाने वाली विधियों द्वारा बाद के विश्लेषण के लिए एक दूसरे से अलग किया जा सकता हैः
केन्द्रापसारण प्रोटीन का द्रव्यमान और आकार उच्च जी-बलों के तहत उसे तलछट की एक विशिष्ट दर देता है, जिससे पृथक्करण की अनुमति मिलती है
जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस ️ विभिन्न आणविक भारों की पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं एक विद्युत क्षेत्र लागू होने पर एक जेल मैट्रिक्स (जैसे पॉलीएक्रिलामाइड) के माध्यम से विभिन्न दरों पर प्रवास करती हैं
तरल क्रोमैटोग्राफी प्रोटीन को गोलाकार मोतियों वाले स्तंभ के माध्यम से उनकी गति के आधार पर अलग किया जाता है। तरल क्रोमैटोग्राफी द्रव्यमान द्वारा पृथक्करण की अनुमति देती है (जेल फिल्टरेशन स्तंभ),आवेश (आयन विनिमय स्तंभ) और लिगांड-बंधन व्यवहार (आफिनिटी स्तंभ)
पुनःसंयोजक प्रोटीन एक प्रोटीन है जिसे संशोधित जीन - पुनःसंयोजक जीन द्वारा कोडित किया जाता है और विशिष्ट पुनःसंयोजक अभिव्यक्ति प्रणाली द्वारा उत्पन्न किया जाता है (प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली देखें) ।पुनःसंयोजक जीन एक नया आनुवंशिक संयोजन है जिसमें एक या एक से अधिक डीएनए खंड या जीन एक अलग अणु या अन्य प्रजातियों से डाले गए हैंप्राकृतिक प्रोटीन की तुलना में, पुनर्मिलन प्रोटीन का उत्पादन अपेक्षाकृत आसानी से बड़ी मात्रा में किया जा सकता है।
पुनर्मिलन प्रोटीन जैविक प्रक्रियाओं जैसे कि साइटोकिन और विकास कारकों, एंजाइम और किनेज़ अनुसंधान और पूरक प्रणाली कार्यों के अध्ययन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।पुनःसंयोजक प्रोटीन को अत्यधिक शक्तिशाली दवाओं के रूप में जाना जाता है जो लक्ष्य से बाहर के दुष्प्रभावों से सुरक्षित हैं, छोटे अणुओं की तुलना में विकसित होने में कम समय लगता है (पुनर्संयोजक प्रोटीन दवाएं देखें) ।
पुनःसंयोजक प्रोटीन बनाने के लिए, जीन को अलग किया जाता है और एक अभिव्यक्ति वेक्टर में क्लोन किया जाता है। पुनःसंयोजक प्रोटीन उत्पन्न करने के लिए प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली की आवश्यकता होती है,प्रोटीन शुद्धिकरण प्रणाली और प्रोटीन पहचान प्रणाली.
पुनःसंयोजक प्रोटीन प्राप्त करने के लिए बुनियादी कदमः
1रुचि के जीन का प्रवर्धन
2. क्लोनिंग वेक्टर में डालें.
3उप क्लोनिंग अभिव्यक्ति वेक्टर में।
4प्रोटीन व्यक्त करने वाले मेजबान (बैक्टीरिया (ई कोलाई), खमीर, स्तनधारी कोशिका या बैकुलोवायरस-कीट कोशिका प्रणाली) में परिवर्तन।
5पुनःसंयोजक प्रोटीन की पहचान के लिए परीक्षण।
6बड़े पैमाने पर उत्पादन (बड़े पैमाने पर किण्वक)
7पृथक्करण और शुद्धिकरण।
चूंकि प्रोटीन के रासायनिक और भौतिक गुण भिन्न होते हैं, इसलिए उन्हें कई आम तौर पर उपयोग की जाने वाली विधियों द्वारा बाद के विश्लेषण के लिए एक दूसरे से अलग किया जा सकता हैः
केन्द्रापसारण प्रोटीन का द्रव्यमान और आकार उच्च जी-बलों के तहत उसे तलछट की एक विशिष्ट दर देता है, जिससे पृथक्करण की अनुमति मिलती है
जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस ️ विभिन्न आणविक भारों की पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं एक विद्युत क्षेत्र लागू होने पर एक जेल मैट्रिक्स (जैसे पॉलीएक्रिलामाइड) के माध्यम से विभिन्न दरों पर प्रवास करती हैं
तरल क्रोमैटोग्राफी प्रोटीन को गोलाकार मोतियों वाले स्तंभ के माध्यम से उनकी गति के आधार पर अलग किया जाता है। तरल क्रोमैटोग्राफी द्रव्यमान द्वारा पृथक्करण की अनुमति देती है (जेल फिल्टरेशन स्तंभ),आवेश (आयन विनिमय स्तंभ) और लिगांड-बंधन व्यवहार (आफिनिटी स्तंभ)
