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संश्लेषित पेप्टाइड्स को कैसे संरक्षित करें?
पेप्टाइड्स को आम तौर पर दीर्घकालिक भंडारण के लिए प्रकाश से दूर संग्रहित करने की आवश्यकता होती है, और इसे -20 डिग्री पर संग्रहीत किया जाना चाहिए, और अल्पावधि के लिए 4 डिग्री पर संग्रहीत किया जा सकता है।थोड़े समय के लिए कमरे के तापमान पर भेजा जा सकता है।पेप्टाइड्स -20 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर होते हैं, खासकर जब फ्रीज में सुखाया जाता है और एक डेसीकेटर में संग्रहीत किया जाता है।फ़्रीज़-सूखे पेप्टाइड्स को हवा में उजागर करने से पहले कमरे के तापमान पर रखा जा सकता है।इससे नमी का प्रभाव कम हो जाएगा, और जब फ़्रीज़ में सुखाना संभव नहीं हो, तो सबसे अच्छा तरीका छोटे कामकाजी नमूनों को संग्रहीत करना है।सीआईएस, मेट या टीआरपी युक्त पेप्टाइड्स के लिए, उनके विघटन के लिए डीऑक्सीजनेशन बफर आवश्यक है, क्योंकि इस पेप्टाइड को हवा द्वारा आसानी से ऑक्सीकरण किया जा सकता है, और बोतल को सील करने से पहले पेप्टाइड के माध्यम से धीरे-धीरे बहने वाली नाइट्रोजन या हाइड्रोजन गैस भी ऑक्सीकरण को कम कर देगी।जीआईएन या एएसएन युक्त पेप्टाइड्स में भी गिरावट का खतरा होता है, और इन सभी पेप्टाइड्स का जीवनकाल इन समस्याग्रस्त सरलता वाले पेप्टाइड्स की तुलना में सीमित होता है।
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यदि मेरा पेप्टाइड 95% शुद्ध है, तो अन्य 5% क्या है?
पेप्टाइड शुद्धता आमतौर पर एचपीएलसी द्वारा 1% एसीटोनिट्राइल प्रति मिनट के ग्रेडिएंट का उपयोग करके निर्धारित की जाती है।संश्लेषण प्रक्रिया के दौरान, अमीनो एसिड के बीच क्रॉस-लिंकिंग दक्षता हमेशा 100% तक नहीं पहुंच पाती है, इस प्रकार गायब अमीनो एसिड के साथ अशुद्धियों की एक श्रृंखला उत्पन्न होती है।इनमें से अधिकांश अमीनो एसिड-हटाए गए अशुद्धियों को शुद्धिकरण के दौरान हटा दिया गया था, लेकिन कुछ में क्रोमैटोग्राफिक प्रोफाइल थे जो लक्ष्य पेप्टाइड से काफी मिलते जुलते थे।पेप्टाइड नमूने में शेष इन अमीनो एसिड विलोपन के साथ दूषित पेप्टाइड्स शेष कुछ प्रतिशत बनाते हैं।
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पेप्टाइड्स को कैसे शुद्ध किया जाता है?
पेप्टाइड शुद्धिकरण आम तौर पर एक उलट-चरण कॉलम (जैसे सी8, सी18, आदि), 214एनएम का उपयोग करता है।बफर सिस्टम आमतौर पर टीएफए, पीएच 2.0 युक्त विलायक होता है।बफ़र A में H2O में 0.1% TFA होता है, और बफ़र B में 1% TFA/ACN/pH2.0 होता है।शुद्धिकरण से पहले बफर ए के साथ घोलें;यदि विघटन अच्छा नहीं है, तो बफर बी के साथ घोलें और फिर बफर ए के साथ पतला करें;अत्यधिक हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स के लिए, कभी-कभी थोड़ी मात्रा में फॉर्मिक एसिड या एसिटिक एसिड जोड़ने की आवश्यकता होती है।क्रूड पेप्टाइड उत्पादों का एचपीएलसी विश्लेषण, यदि पेप्टाइड लंबा नहीं है (15एए से नीचे), तो आम तौर पर एक मुख्य शिखर होगा, और मुख्य शिखर आमतौर पर पूर्ण लंबाई वाला उत्पाद होता है;20aa से अधिक लंबे पेप्टाइड्स के लिए, यदि कोई मुख्य शिखर नहीं है, तो आणविक भार निर्धारित करने के लिए द्रव्यमान के साथ एचपीएलसी का उपयोग करने की आवश्यकता होती है, और फिर यह निर्धारित किया जाता है कि कौन सा शिखर संश्लेषित होने वाला पेप्टाइड है।
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पेप्टाइड के सिरों को कैसे संभाला जाना चाहिए? इसे मुफ़्त रखें या ब्लॉक करें?
पेप्टाइड्स का उपयोग प्रोटीन का अनुकरण करने के लिए किया जाता है।प्रोटीन के प्रदर्शन की नकल करने के लिए, हमें प्रोटीन के समान संरचनाओं और आवेशों वाले पॉलीपेप्टाइड को संश्लेषित करने की आवश्यकता है।जब एक पेप्टाइड को प्रोटीन से "काट दिया" जाता है, तो दोनों सिरों पर आवेशों की संख्या जीन बॉडी प्रोटीन से भिन्न होगी।हमें उन्हें सुसंगत बनाने के लिए कंपोजिटिंग रणनीति को बदलने की जरूरत है।सामान्य तौर पर: यदि अनुक्रम प्रोटीन के सी-टर्मिनस से है, तो एन-टर्मिनस को एसिटिलेशन द्वारा ढालें;यदि यह प्रोटीन के एन-टर्मिनस से एक अनुक्रम है, तो संशोधन द्वारा सी-टर्मिनस को ढालें;यदि यह प्रोटीन के मध्य भाग से है, तो दोनों सिरों को परिरक्षित करने के लिए एसिटिलीकरण और संशोधन का उपयोग करें।
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पीईजी-संशोधित पेप्टाइड्स के क्या फायदे हैं?
पॉलीइथाइलीन ग्लाइकॉल संशोधन सहसंयोजक बंधन के माध्यम से लक्ष्य अणु में उच्च आणविक पॉलिमर (एथिलीन ग्लाइकॉल) जोड़ना है।पॉलीइथाइलीन ग्लाइकोल संशोधन पॉलीपेप्टाइड को छिपाकर मेजबान कोशिका की प्रतिरक्षा प्रणाली को धोखा देता है, पॉलीपेप्टाइड के चिकित्सीय प्रभाव को बढ़ाता है, और हाइड्रोफोबिक दवाओं की घुलनशीलता और जैवउपलब्धता को बढ़ाता है।यह गुर्दे की निकासी को कम करके पेप्टाइड्स के परिसंचरण को भी लम्बा खींच सकता है।
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पेप्टाइड्स में फ्लोरोसेंट संशोधन शुरू करते समय क्या ध्यान देना चाहिए?
केएस-वी पेप्टाइड पॉलीपेप्टाइड अणु और फ्लोरोसेंट संशोधन के बीच एक लिंकर जोड़ने का सुझाव देता है, जो पॉलीपेप्टाइड की तह और रिसेप्टर के बंधन पर फ्लोरोसेंट संशोधन के प्रभाव को कम कर सकता है।हालाँकि, यदि प्रतिदीप्ति संशोधन का उद्देश्य विभिन्न संरचनाओं के बीच प्रतिदीप्ति प्रवासन की मात्रा निर्धारित करना है, तो लिंकर को पेश करने की अनुशंसा नहीं की जाती है।
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फॉस्फोराइलेशन-संशोधित पेप्टाइड्स को डिजाइन करते समय किस पर ध्यान देना चाहिए?
केएस-वी पेप्टाइड अनुशंसा करता है कि फॉस्फोराइलेशन संशोधनों को डिजाइन करते समय, युग्मन दक्षता में कमी से बचने के लिए फॉस्फोरिलेशन संशोधन एन-टर्मिनस से 10 अमीनो एसिड से अधिक नहीं होना चाहिए।
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क्या आप डी-पेप्टाइड कर सकते हैं? डी-प्रकार के प्राकृतिक अमीनो एसिड कितने प्रकार के होते हैं?
कर सकना।डी-प्रकार के प्राकृतिक अमीनो एसिड 19 प्रकार के होते हैं।प्राकृतिक अमीनो एसिड में ग्लाइस की कोई चिरल संरचना नहीं होती है, और केशेंगजिंग पेप्टाइड में अन्य प्राकृतिक अमीनो एसिड की डी-प्रकार संरचना का चयन किया जा सकता है।विवरण के लिए, कृपया विशेष अमीनो एसिड की सूची देखने के लिए आधिकारिक वेबसाइट पर लॉग ऑन करें।
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केएस-वी पेप्टाइड संश्लेषण में कितने फॉस्फोराइलेशन साइट्स को शामिल किया जा सकता है?
आम तौर पर, अधिकतम तीन होते हैं, और इसका विश्लेषण विशिष्ट अनुक्रम के अनुसार करने की आवश्यकता होती है।
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पॉलीपेप्टाइड्स एन-टर्मिनल एसिटिलीकरण और सी-टर्मिनल संशोधन संशोधन से क्यों गुजरते हैं?
इस तरह के संशोधन पॉलीपेप्टाइड अनुक्रम को मूल प्रोटीन के गुण प्रदान कर सकते हैं।